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        Absin一種類器官藥敏活性檢測方法

        發布時間:2023-07-27      點擊次數:68

        類器官在藥敏藥篩這塊的活力檢測方法采用ATP生物發光技術的方法相對其它方法更簡便,更準確。小愛帶您了解一下檢測方法吧。

         

        1、ATP生物發光技術原理

         

        在類器官細胞培養物中加入相應試劑使類器官裂解,釋放ATP,熒光素酶催化底物熒光素的轉化,高效利用ATP的能量,發射光子形成光信號。發光強度與ATP在一定范圍內成正比,而ATP又與活細胞數目又呈正比,因此可以對類器官活細胞數目進行定量檢測。


         

        2、類器官ATP生物發光方法

         

        (1)類器官的準備

        使用適合進行發光檢測的24孔板,每孔接種類器官與基質膠混合物25ul平鋪到孔底部,同時設置不含類器官的基質膠與培養液孔作為陰性對照,按照類器官培養的常規方法培養類器官。如有需要,可加入藥物處理類器官。此外,如有必要也可以設置類器官的濃度梯度,以便后續確定試劑盒的使用效果。

         

        (2)試劑準備

        a. 融化:將ATP活性檢測試劑盒置于2~8℃或室溫條件下融化;
        b. 使用前輕柔顛倒幾次使溶液混合均勻。

         

        (3)檢測步驟

        a. 于培養箱中取出待測類器官培養板,室溫放置30min,以使培養板溫度平衡至室溫;
        b. 加入與待測類器官培養物等體積并平衡至室溫的緩沖液(abs9730)。例如,使用24孔培養板時,先去除類器官培養基,用類器官緩沖液置換靜置清洗3次,然后吸取25μl本品加入25μl待測類器官培養物中(加入體積與基質膠團混合物體積一致);
        c. 劇烈振蕩5min使類器官充分裂解;室溫放置25min以穩定發光信號,即可進行檢測;
        d. 使用具有檢測化學發光功能的多功能酶標儀進行化學發光檢測。請根據儀器要求設置相應的參數,每個孔的檢測時間一般為0.25-1s或更長時間,具體需根據儀器的檢測靈敏度進行適當的調整;
        e. 根據化學發光讀數直接計算類器官的相對活力,或根據ATP標準曲線計算出ATP的量從而計算出類器官細胞的相對活力。類器官在0-30個類器官/孔的類器官密度范圍內有良好的線性關系,ATP標準品0-10,000nM濃度范圍有良好的線性關系;

         

        注:檢測效果因類器官的種類不同而有所不同,對于一些ATP含量特別高的類器官,在類器官數量達到100個后可能會不呈現線性相關,但化學發光讀數還是會繼續升高的。

         

        (4)ATP 標準曲線的設置(選做):

        把自備的ATP標準溶液用PBS或類器官培養液稀釋成適當的濃度梯度。初次檢測可以設置0、10、30、100、300、1000、3000、10,000nM這幾個濃度,24孔板每孔加入100μl的標準品。如有必要,在后續的實驗中可以根據類器官中的ATP含量對標準品的濃度范圍進行適當調整。如果用類器官培養液來稀釋ATP標準品,稀釋后需立即進行后續的發光檢測,否則培養液中的ATPase等可以消耗ATP的酶會導致ATP含量下降。

         

        今天講解就到這了,大家如有類器官活力檢測問題,歡迎入群交流哦!


         

        貨號

        品名

        規格

        abs9444

        Organotial人肝癌類器官培養基試劑盒

        1kit

        abs9445

        Organotial人結直腸癌類器官培養基試劑盒

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        abs9443

        Organotial人肺癌類器官培養基試劑盒

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        abs9449

        Organotial人胃癌類器官培養基試劑盒

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        abs9447

        Organotial人胰腺癌類器官培養基試劑盒

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        abs9589

        Organotial人鼻咽癌類器官培養基試劑盒

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        abs9446

        Organotial人乳腺癌類器官培養基試劑盒

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        abs9558

        Organotial人卵巢癌類器官培養基試劑盒

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        abs9590

        Organotial人宮頸癌類器官培養基試劑盒

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        abs9448

        Organotial人子宮內膜癌類器官培養基試劑盒

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        abs9739

        Organotial人腦膠質瘤類器官培養基試劑盒

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        abs9743

        Organotial人前列腺癌類器官培養試劑盒

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